Номинант № 5 — Мурадян Жора Юрикович


НОМИНАНТ № 5 на ПРЕМИЮ имени П.П. ШОРЫГИНА 2017 г.

 Мурадян Жора Юрикович

9
Место работы, должность: Аспирант,ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности»,Адрес: г.. Щелково, Московская область.

Хитозан в качестве защитной среды при изготовлении сухих вакцин и длительном хранении симбиотического препарата.

Срок годности большинства жидких инактивированных вакцин составляет 1 год и для его увеличения наиболее перспективным методом является лиофильное высушивание. В связи с этим, была изучена возможность применения хитозана в качестве защитной среды при разработке вакцины сухой инактивированной против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. Учитывая перспективу применения хитозана и его производ¬ных для получения биопрепаратов, важной работой являлась разработка состава защитной среды высушивания с компонентом хитозана для длительного хранения симби¬отических препаратов.
Новым перспективным направлением для сушки вакцин является хитозан. Его особенностью является: высокая защитная активность, сорбционная активность, иммуностимулирующие свойства. В процессе исследований было лиофильно высушено по 20 флаконов инактивированного теотропином вируса с каждой из испытываемых сред. Для оценки эффективности сушки проверена растворимость вакцины и антигенная активность полученного препарата до сушки и после сушки. Показано, что после сушки биопрепарат имел хорошую растворимость – в среднем 4,0-5,0 минуты. Это защитная среда № 1 (4,2 минуты), защитная среда № 2 (5,0 минут); защитная среда № 4 (4,0 минуты) и защитная среда № 6 (4,8 минуты).
Результаты исследований показали, что лиофильная сушка снижает антигенную активность препарата в среднем на 0,2 log2, но при этом после нее с изучаемыми защитными средами превышает активность инактивированного вируса ИРТ без защитных сред. Это свидетельствует об иммуностимулирующих свойствах защитных сред. Особенно это касается защитной среды с хитозаном. Так, у мышей, которым вводили инактивированный вирус ИРТ с хитозана сукцинатом в 0,5% концентрации, титр антител до сушки был 0,4±0,22, а после сушки – 3,14±0,19 log2. Титр антител у мышей других опытных групп также превышал уровень животных, которым вводили инактивированный вирус ИРТ без защитных сред.
Проведенные исследования показывают, что данный биополимер защищает антигены вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота при лиофильном высушивании, после чего препарат не уступает по антигенной активности вакцинам с использованием коммерческих защитных сред. Помимо этого, хитозана сукцинат обладает хорошей растворимостью, что позволяет использовать физиологический раствор для восстановления инъекционной формы вакцины, отказавшись от дорогостоящих растворителей.
Оптимизированная среда разрабатываемого препарата высушивания готовилась по следующей прописи: концентрация основных компонентов имеет следующие значения: желатин -1,5 %; сахароза — 10,0 %; хитозан пищевой — 2 %. В качестве растворителя — калий фосфатный буфер. Концентрация жизне¬способных клеток эшерихий перед сушкой 12,4 млрд/см3.
Осадок бактериальной массы после концентрирования сме¬шивали с защитной средой высушивания. После тщательного перемешивания смешанную с защитной средой высушивания бактериальную суспензию до концентрации 10-14 млрд./см3 E. coli в жидком препарате по 2 или 4 см3 расфасовывают с соблю¬дением условий асептики в стерильные флаконы объемом 10 или 20 см3 и проводят ее сублимационное высушивание.
Контрольная среда высушивания имеет следующий состав: желатин — 2,0 %; сахароза — 10,0 %. В качестве растворителя — калий фосфатный буфер. Концентрация жизнеспособных клеток эшерихий перед сушкой 12,83 млрд/см3.
Анализ представленных результатов по сохраняемости жизнеспособных эшерихий позволяет сделать вывод, что на разработанной защитной среде с применением хитозана E. coli эффективней переносят сублимационное высушивание и дли¬тельное хранение. В результате увеличивается срок длительно¬го хранения препарата до 12 месяцев и сохраняемость жизнеспо¬собных клеток выше на 15,34 %, чем у ранее используемой защитной среды препарата » Пролизер». Проведенные исследо¬вания использованы при разработке технологии нового симбио¬тического препарата на основе штамма E. coli VL-613.

Список работ по заявляемой теме:
1. Использование полисахарида хитозана при конструировании вакцины против некробактериоза животных / Н.В. Мельник, А.Я. Самуйленко, А.С. Тройнин, А.И. Албулов, М.А. Фролова, Р.Н. Мельник, Ж.Ю. Мурадян // Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК: — Материалы Международной научно-практической конференции, посвещянной 45-летию института, 2014 г. – С.163-166.
2. Красочко, П.П. Сравнительное изучение гуморального иммунного ответа у телят на введения вируса ИРТ с различными адъювантами / П.П. Красочко, Н.К. Еремец, А.И. Албулов, М.А. Албулов, М.А. Фролова, Ж.Ю. Мурадян, И.В. Бобровская, В.П. Красочко // // Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК: — Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 45-летию института, 2014 г. – С.124-130.
3. Результаты использования хитозана в составе вакцины против некробактериоза животных / Н.В. Мельник, А.Я. Самуйленко, А.С.Тройнин, А.И. Албулов, М.А. Фролова, Н.К.Еремец, Р.Н.Мельник, Ж.Ю.Мурадян //Веткорм. -2014 г.-№6. – С.34-35.
4. Адъювантная активность хитозана при конструировании антибактериальных и противовирусных вакцин / А.И. Албулов, М.А. Фролова, В.П. Варламов, А.В. Гринь, Ж.Ю. Мурадян, П.П. Красочко, П.В. Красочко // «Актуальные проблемы биотехнологии в аграрно-промышленном комплексе» , международная научно-практическая конференция Минск.- 2015 г. – С.33-36.
5. Красочко, П.П. Использование хитозана в качестве защитной среды при изготовлении сухих вакцин / В.П. Красочко., В.И. Еремец., А.И. Албулов, М.А. Фролова, Ж.Ю. Мурадян // Известия Уфимского научного центра РАН 2016, № 3(1). – С. 128-130.
6. Патент РФ на изобретения №2571157 «Защитная среда высушивания для получения симбиотического препарата» авторы: И.В. Павленко, А.И. Албулов, А.А. Нежута, Ю.Д. Фролов, В.И. Еремец, Н.К. Еремец, Н.А.Бондарева, Е.Э. Школьников, Ж.Ю. Мурадян [и др.], заявка № 2014109049 2014 г., зарегистрировано: 2015 г.
7. Бирюченков Д.А. Совершенствование инактивированной вакцины против репродуктивно-распираторного синдрома свиней / Д.А. Бирюченков, Е.П. Баборенко, Е.А. Авситидийский, Д.А. Долгов, Ж.Ю. Мурадян, А.И. Албулов // «Ветеринария сегодня» научный журнал ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») 2016, №1 (16). – С.16-19.